狂犬病疫苗的研究及其进展

浙江省医学科学院学报２００６年１２月（总第６７期）

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狂犬病疫苗的研究及其进展

姜立民

庄昉成

狂犬病是一种由狂犬病毒引起的人兽共患病，该病是以侵犯中枢神经系统为主的急性传染病，一旦发病，死亡率高达１００％。尽管这是一个古老的疾病，但人类至今仍然无法消灭它，在我国曾一度得到有效控制，但近年来狂犬病疫情快速回升［１］，研制并推广使用安全高效的人用狂犬病疫苗是控制狂犬病疫情的有效手段。本文就狂犬病疫苗及其研究进展，特别是我国在狂犬病疫苗方面的发展探讨如下。

反应也较轻，不再出现变态性脑脊髓炎。但是也出现过一些免疫失败的病例，分析原因很大程度与疫苗未经浓缩抗原量偏低，疫苗效价也未能达到ＷＨＯ规定的２．５ＩＵ／剂的标准有关。因此卫生部在１９９３年决定生产效价≥２．５ＩＵ／剂的浓缩或浓缩纯化的铝佐剂疫苗取代未浓缩疫苗。但是未纯化的浓缩疫苗含有一定的杂蛋白，如在生产过程中加入异性小牛血清、含狂犬病毒的豚鼠脑组织和地鼠肾细胞蛋白等，常引起不良反应，如注射部位疼痛、大面积红肿、全身性荨麻疹、过敏性紫癜、血管神经性水肿等，个别出现休克，神志不清，并有危及生命者，严重不良反应发生率５％～１０％［５］。因此国家药品监督管理局决定生产和使用纯化的浓缩疫苗取代未纯化的浓缩疫苗。研究报导加铝佐剂的狂犬病疫苗虽然有提高免疫力的作用，但由于疫苗的作用缓慢，产生的中和抗体较迟，而狂犬病疫苗主要用于暴露后免疫，要求疫苗快速诱导中和抗体，发挥中和抑制病毒以达到保护的作用，否则就有可能造成免疫失败的严重后果；铝佐剂不能刺激Ｔｈ１的细胞活性，也不加强

１狂犬病疫苗回顾

１８８５年法国科学家巴斯德首次将狂犬

病病毒在兔脑连续传代和干燥减毒而制成的疫苗，奇迹般的救治了一名被疯狼严重咬伤的９岁小孩，开辟了人用狂犬病疫苗的新纪元［２］。１００多年以来，特别是近二三十年现代细胞培养技术和分子生物学的发展，狂犬病疫苗取得了重大进展。

我国在上世纪８０年代前所用的狂犬病疫苗都是粗制的羊脑组织狂犬病疫苗，这种疫苗不但免疫效果不理想，而且副反应大，尤其是脑组织引起的变态性脑脊髓炎。因此在１９６５年开始，由卫生部武汉生物制品研究所等多家单位合作用狂犬病固定毒北京株通过原代地鼠肾细胞适应传代，研制成功原代地鼠肾细胞培养的灭活疫苗［３］。该疫苗是经福尔马林灭活加Ａｌ（ＯＨ）３制成，于１９８０年获得生产证书并开始生产和应用，取代了羊脑疫苗。该疫苗总的预防效果是肯定的，

ＣＤ８＋细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）的活性，即不能增

强细胞免疫，另外铝佐剂是引起副反应的重要原因，如硬结、红肿等［５－９］。鉴于此国家食品药品监督管理局局决定生产和使用无铝佐剂的狂犬病疫苗代替含铝佐剂疫苗。目前已研制成功二种类型的细胞培养的无铝佐剂的狂犬病疫苗，一种是地鼠肾细胞纯化疫苗，另一

作者单位：３１００１３，杭州，浙江省医学科学院病毒病研究所

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种是Ｖｅｒｏ细胞纯化疫苗。

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狂犬病疫苗。用国产（辽宁成大生物技术有限公司生产）无佐剂纯化Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗与相同细胞基质的无佐剂纯化进口疫苗

２２．１

我国狂犬病疫苗现状

无佐剂纯化原代地鼠肾细胞狂犬病疫无佐剂纯化浓缩原代地鼠肾细胞狂犬

苗（ＰＨＫＣＶ）

病疫苗［３，９－１１］在纯化浓缩地鼠肾细胞佐剂狂犬病疫苗基础上，产生工艺与后者相似，毒种也是狂犬病固定毒北京株通过在原代地鼠肾细胞适应传代的ａＧ株，在原代地鼠肾细

７．０胞的病毒滴度可达１０６．０～ＬＤ５０／ｍＬ，病毒经福

［即法国安万特巴斯德疫苗（维尔博）］进行的

疫苗人体副反应和免疫效果观察比较［１３］：所有接种对象均未发生即时反应，在接种国产疫苗组的５０２人中，局部反应以接种部位搔痒、疼痛为主，反应率０．６５％，在接种进口疫苗组的１００人中，反应率０．４３％，两组差异无

２

显著意义（χ＝０．６０５４，Ｐ＞０．０５）。全身反应观

尔马林灭活，纯化工艺用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ柱层析，杂蛋白的去除率在９９％以上，但最后不加Ａｌ（ＯＨ）３佐剂，加适当稳定剂制成。用河南普新生物工程有限公司生产的无佐剂疫苗和佐剂疫苗各１批（效价均为４．２ＩＵ／ｍＬ）进行疫苗人体副反应和免疫效果观察比较，在接种无佐剂疫苗的２７０人中，无发热反应，无硬结、红肿等局部反应，仅１６人主诉注射部位疼痛；在接种佐剂疫苗的３９人中亦无发热反应，但有５名于第１、２、３针时发现硬结，均于４８ｈ消失，疼痛和硬结人数共１４名。两种疫苗的抗体应答，所有志愿者在接种前抗体均为阴性，在首次免后７天，佐剂疫苗３７人中仅有３人抗体阳转（≥０．５ＩＵ），阳转率８．１％；而无佐剂疫苗３１人中抗体阳转

察，仅在首针接种后有少数人出现３７．１～

３８．５℃的一过性体温升高，经７２ｈ观察，反应

消失，在整个观察过程中均未发现异常反应和中、重度副反应。两种疫苗的抗体应答，国产疫苗组检测５０人，进口疫苗组检测３５人，首针免疫后ｌ４、４５天，２组血清抗体阳转率均为ｌ００％。前者免疫后１４天抗体效价为

０．８～ｌ１．９ＩＵ／ｍＬ，抗体几何均值为５．２ＩＵ／ｍＬ；

免疫后４５天抗体效价为２．７～９．２ＩＵ／ｍＬ，抗体几何均值为９．５ＩＵ／ｍＬ。后者免疫后１４天抗体效价为０．９～ｌ２．７ＩＵ／ｍＬ，抗体几何均值为

５．６ＩＵ／ｍＬ；免疫后４５天抗体效价为１．５～２５．４ＩＵ／ｍＬ，抗体几何均值为９．８ＩＵ／ｍＬ，两组

抗体阳转率和抗体几何平均滴度差异无显著意义。因此，我国研制纯化Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗的质量已达国际先进水平。

１４人，阳转率４５．２％。在免后４５天，无佐剂

疫苗和佐剂疫苗阳转率均为１００％，几何平均滴度（ＧＭＴ）分别为１６．５ＩＵ和１７．５ＩＵ。以上

结果显示无佐剂疫苗副反应很轻，局部反应低于佐剂疫苗；另外无佐剂疫苗具有快速产生中和抗体的优点，可使人更早获得保护。

３狂犬病疫苗研究进展

３．１纯化浓缩人二倍体细胞疫苗

目前用于我国狂犬病疫苗生产的细胞基质为原代地鼠肾细胞或Ｖｅｒｏ细胞，前者存在动物容易受细菌、病毒、寄生虫等外源物质污染，且需要建设相应动物房，大量处死动物不符合等缺点；而后者由“动物伦理学”于是传代细胞系，有一定的致瘤性，细胞残余ＤＮＡ必须达到标准。人二倍体细胞恰恰没有上述缺点，理应研制开发。

美国Ｗｉｓｔａｒ研究所Ｗｉｋｔｏｒ等首先进行狂犬病固定毒在人二倍体细胞上的适应传代研究，后法国和德国等国先后进行了人二

２．２无佐剂纯化浓缩Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗

（ＰＶＲＶ）

我国已研制和生产应用Ｖｅｒｏ细胞的无佐剂狂犬病疫苗，毒种为ａＧ株、巴斯德ＰＶ２０６１株或ＣＴＮ－１株，Ｖｅｒｏ细胞从美国ＡＴＣＣ引进。病毒在Ｖｅｒｏ细胞上接种后培养

７．５

液的病毒滴度一般在１０７．０～ＬＤ５０／ｍＬ，并可以

多次收获［１２］，经浓缩、灭活、纯化，制成无佐剂

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坛株［ …… 此处隐藏：5879字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……