苦丁茶中的熊果酸和齐墩果酸的含量测定

关于苦丁茶的文献

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中医药学报 20年第 3卷第 2 07 5期

苦丁茶中的熊果酸和齐墩果酸的含量测定石敏娟朱卫丰刘耀明2,,(. 1江西中医学院，江西南昌 300; . 3062江中集团，江西南昌 300) 306摘要：目的：用高效液相色谱法同时测定苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸的含量。方法：用 H pr应采 ye—

sO S 220 m× . m,m ) i D一 (5m 46 5 a色谱柱， l m t柱温：℃, 3 0甲醇： .%磷酸水溶液(5 1) 01 8:5为流动相，流速为：06 l i~,测波长：1n .m n检 m 20m。结果：熊果酸在 0o 0 4n l范围内， .4— .01 m g浓度和峰面积呈良好的线性关系，=099, r .99平均回收率为 9 .2,S 90% R D为 27%; .4齐墩果酸在 0040 0 34 gm范围内， .34 .4m l 浓度和峰面积呈良好的线性关系，=099, r .92平均回收率为 9 .7,S 7 8% R D为 05%。结论：方法快速 .7本简便，结果准确、可靠，重现性好。 关键词：丁茶；苦熊果酸；齐墩果酸； P C H L

中图分类号：9 72 R 2、

文献标识码： A

文章编号：02 3220)2— O5 2 10—29(07 0 04—02方法与结果

苦丁茶在古代文献中又被称为“皋卢”最早出现，在东汉成书的《桐君录》中药大辞典》。《上记载苦丁茶能散风热、清头目、除烦渴，治头痛、可齿痛、目赤、热病

2 1色谱条件 .色谱柱： ye i D一220 m×4 6 mi,t ) H prl S (5m sO .t d5, u ma

烦渴、聍耳、痢疾。苦丁茶主要含三萜皂苷类成份，其余还有黄酮类、氨基酸和一些微量元素。其中的熊果酸和齐墩果酸既能降血脂，又能降肝脂，是具有开发潜力的降脂护肝药物[』】。近年来， 对苦丁茶的化学成分和药理作用的报道较多，但对其质量控制方面的报道较少，尤其是对苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸的同时测定还未见有报道。本试验采用 H L P C法，同时测定了苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸的含量。结果表明该方法简便可行、敏、灵准确、重现性好。1试验材料

流动相为甲醇：.%磷酸水溶液( 01体积比为 8:5, 5

l)流速为： .m i~,温为 3℃, 0 6 lm n柱 0检测波长为 2 Om。 1h

22对照品溶液的配制 .熊果酸对照溶液的配制：密称取熊果酸对照品精

2 . n,甲醇溶解后， 00唱用 o定容于 5m容量瓶中，浓 0l其度为 04r/ l . n m, 0 g作为测定样品的标准溶液。 齐墩果酸对照溶液的配制：精密称取齐墩果酸对照品 1.0 g用甲醇溶解后，容于 5m容量瓶中， 72m,定 0l

其浓度为 0 341m, .4Ⅱ/l g作为测定样品的标准溶液。23供试品溶液的配制 .

11仪器 .

A ln 10 get 0高效液相色谱 ( i l真空脱气机 G39、 1 A 7四元泵 G 31、 11A手动进样器、 11B G35紫外检测器)电；子天平：s2s B1 ( 4北京赛多利斯仪器系统有限公司)电；热恒温水浴锅：H一 ( H 2常州国华电器有限公司)微孔；滤膜 ( .5 n。 04 t ) a12试药 .

精密称取干燥的过 6 0目筛的苦丁茶粉末 1, g加 1m无水乙醇， 9℃水浴提取 2次， 4l在 0每次 15。过 .h滤，合并滤液，用无水乙醇定容于 5m容量瓶中， 0l充分摇匀， 04t的微孔滤膜过滤作为供试品溶液。用 . n 5n 24线形考察 .分别准确移取 04m// . g熊果酸对照品溶液 12 0 m、、456 lml置于 lm容量瓶中，甲醇定容到刻度，、、、O, Ol用

齐墩果酸对照品(江西本草天工有限责任公司生产)熊果酸(;中国药品生物制品检定所 )甲醇为色谱；级；水为超纯水；其余试剂均为分析纯；苦丁茶于 20 05年 l月购于江西婺源天佑药材公司， 1经鉴定为冬青科冬青属苦丁茶 (l kc ca JTeg。 1xui hC.,sn) e l n收稿日期 -06 9—1 ' 0—0 2 8修回日期：O7 2 8 2o~0~2

配制成标准系列。分别准确移取 034 g￣齐墩果 .4m/ n酸对照品溶液 1245 6 lm,、、、、、O l置于 lm容量瓶中， Ol

用甲醇定容到刻度，配制成标准系列。吸取上述溶液， 依次进样 l/, O以浓度( l为横坐标， d m )峰面积为纵坐标，制标准曲线。回归方程为：绘熊果酸： Y=111一1.,=099, 00x 76r .99线形范围为：.4 04 0

0 .0

作者简介：石敏娟 ( 7一)女， 1 6,在读研究生， 9主要从事药物分析方面的工作。

m一； l齐墩果酸： Y=1 9X一 479 r 0 99, 1 4 5 .7,= .92线形 0范围为： .34 0 34 gml 0 04 0 .4 m ~。结果见图 1图 2、。

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A 2 P. I, 0 7, 13 No 2 C V A l 2 0 Vo .5, . l g

图 1混合标准品的 H L P C图

图 2样品的眦

图

2 5精密度试验 .吸取供试品溶液 1, 0连续进样 5测定熊果酸次，和齐墩果酸的面积，S R D分别为 14%和 20%。 .5 .8 2 6重现性考察 .精密称取同一批苦丁茶 5 (份每份 100 )按供 . g, 0试品的制备方法处理，分别进样 1测定峰面积， 0, R D分别为： S熊果酸：.9, 26%齐墩果酸：.7 38%。 27稳定性考察 .取同一供试品溶液，分别在 O 369 1h、、,、2进样，测

定峰面积，S R D分别为：果酸： . 1,墩果酸：熊 08%齐 13%。表明供试品溶液在 1h . 4 2内稳定。 28加样回收率试验 .取已知含量的苦丁茶粉末，份约 02,加浓每 .g添度为 100 gm的熊果酸对照品溶液 3 l添加浓度 .3m/ l m,为 0 34 g 1 .4￣/的齐墩果酸对照品溶液 2 l按 2 3项 m m, .下供试品溶液的制备方法处理并测定，计算含量和平均回收率、S。结果见表 1 RD。

表 1回收率的实验结果

2 9样品的测定 .

取不同产地和季节的苦丁茶，按供试品制备方法处理，制备样品溶液，在与标准品相同的色谱条件下， 将样品溶液进样，每次 1,叫记录峰面积，计算熊果酸和齐墩果酸的含量。结果见表 2。表 2不同季节、同产地苦丁茶中熊果酸不和齐墩果酸含量测定结果

3讨论

本研究曾采用超声、加热回流、冷浸和索氏提取 4 种方法对样品进行处理，结果表明加热回流和索氏提取的提取率比其他 2种方法高出许多，但它们两者之间的差异较小，由于索氏提取费时，以，所提取方法选取加热回流提取。对于提取溶剂进行选择时，选用了甲醇、无水乙醇、氯仿，结果表明，无水乙醇的提取率最高，且应用安全，价格低廉，故提取溶剂选择无水乙醇。

齐墩果酸与

熊果酸为同分异构体，结构与性质均极其相似，在天然植物中往往共生互存，分离测定较为困难。在用 H L P C测定时，用甲醇一水做流动相，熊果酸和齐墩果酸的分离度小于 1且峰形不好，水中加，在入01 .%磷酸，其分离度可达到 16, .峰形也得到很好 9的改善。在测定中流速对分离度的影响也比较大，在流速为 l lmn m i时，分离度只能达到 13而当流速 .,降低到 O6 lmn . i m时，分离度就大于 15基本可达 .,到基线分离。 在本试验的样品含量测定时，能由于在市场上可购买的苦丁茶是隔年的茶叶，也可能其中掺人其他叶子，质量比较低劣。所以，其中熊果酸和齐墩果酸的含量比较低。 参考文献：[]刘刚， 1刘焱文 .苦丁茶的化学成份及药理研究进展[]湖南中医杂 J.志，99 2( )4 19,11:6—4 . 7

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