2010赤芝、紫芝三萜类成分指纹图谱的优化与比较

2010赤芝、紫芝三萜类成分指纹图谱的优化与比较

华南理工大学学报 (自然科学版 )第3 8卷第 8期21 0 0年 8月J u na fSo t i a Un v riy o c n l g o r lo u h Ch n i e st fTe h o o yVO . 8 No. 13 8

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文章编号：10—6 X(0 0 0— 110 0 055 2 1 ) 802—5

赤芝、紫芝三萜类成分指纹图谱的优化与比较水黄生权魏刚姚松君。刘翠玲宁正祥 (. 1华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 5 0 4; . 16 0 2广州中医药大学新药开发中心，东广州 5 00;广 10 63无限极 (国 )限公司，东江门 59 5 ) .中有广 2 16

摘

要：对高效液相色谱的色谱条件进行优化，立灵芝三萜类成分的指纹图谱分析方建

法，定赤芝、拟紫芝指纹图谱的共有模式，并将其初步应用于评价赤芝与紫芝的质量差异。优化后的流动相为乙腈一%冰醋酸 (度洗脱 )检测波长为 2 2r流速为 1/ i, 2梯， 5 m, i m n mL

柱温为 3℃,4批赤芝、 5 1 7批紫芝共标示出 2 9个共有峰 .别了 3个成分 (芝酸 A、:鉴灵 c、 G)发现灵芝酸 A的峰最强；,赤芝与紫芝的共有峰相对比值较接近，紫芝的单位生药峰但面积只有赤芝的 5~1%左右，明含灵芝制剂的质量评价应采用指纹图谱与含量测% 0说

定相结合的方法.用优化后的方法获得的灵芝三萜指纹图谱表明，芝三萜类成分较其采赤它文献报道多，紫芝中三萜类成分能明显检出，明该方法准确可靠，说重复性好. 关键词：芝；紫芝；三萜类化合物；纹图谱；高效液相色谱赤指

中图分类号： S 1 .; Q407 T 2 84 T 6 .2

di1.9 9ji n 10 -6 X 2 1.80 3 o:036/.s .0055 .000 .2 s

灵芝 ( l s a o em )灵芝科灵芝属药用 Go yg ndr a为 s

紫芝未见出峰 .中在文献[—]基础上，化文 59的优

真菌，始载于汉代《神农本草经》被列为上品.芝，灵属共有 8 0多种灵芝，国药典…规定赤芝 ( a o中 G n—dr alc u L

ys e r ) as )紫芝 ( a o em i m( es. xF. K rt和 ud . G n—

分析方法，拟定赤芝、芝三萜酸指纹图谱共有模紫式，将其初步应用于评价赤芝与紫芝的质量差并异，灵芝药材与含灵芝制剂的质量控制提供一为

dr ies h o X t hn ) e sll Z a, u e Z a g的干燥子实体为药 ma lle

定的参考 .

用正品.灵芝含有多种化学成分，三萜类化合物、如 灵芝多糖、物碱、苷等有效成分，中三萜类化生核其合物为灵芝主要的有效成分，有多种生理活具性 J如灵芝酸 A、、。. B C和 D能抑制小鼠肌肉细胞组胺的释放，芝酸 F有很强的抑制血管紧张素灵酶的活性，芝孢子酸 A则对四氯化碳和半乳糖赤胺及丙酸杆菌造成的小鼠转氨酶升高有降低作用 .目前，有关灵芝三萜类成分的指纹图谱研究

1材料与方法1 1材料与试剂 .灵芝酸 C、 G标准品，度大于 9%;芝酸纯 8灵

A,度大于 8%,由广州中医药大学中药学院丁纯 6均平研究员馈赠.芝药材的来源见表 1经广州中医灵，药大学第一附属医院药剂科黄月纯主任中药师鉴定，芝药材分别为赤芝 ( a o e a l iu L ys灵 G n dr c m( es. m ud

已有报道，黄书铭等建立的图谱标示了赤芝的 8个峰；保明等建立的图谱标示了赤芝的 1李 9个峰；丁平等建立的图谱标示了赤芝的 1 8个峰，收稿日期： 0 9 1—8 20—2 2

e r) as )紫芝 (;ndrl, e￥ Z a, u xF. K rt和 . ( oel￣/e ho X a T i 2 a n e Z ag的干燥子实体 . t hn ) 乙腈 (国 Mec司 )德 rk公为色谱纯，它试剂均为分析纯 .其

基金项目：东省自然科学基金资助项目 ( 1 10 7 10 00;东省科技计划项目( 0 7 0 0 00 0 广 8 50 0 0 00 2 )广 2 0 B 64 1 1 )

f￣

C: r黄生权 (9 7)男， 17 -,博士生，主要从事中草药功能食品的研究与开发. - al h ag iog2 0 iacm E m i: un fh n0 2@s .o e n

十通讯作者：魏

刚( 99 )男， 16一，研究员，主要从事中药新药研究与指纹图谱分析. - a: e ag2@13 em E m i w i n0 1 6 .o l g

2010赤芝、紫芝三萜类成分指纹图谱的优化与比较

华南理工大学学报 (自然科学版)表 1不同赤芝与紫芝的来源”Ta l Orgn o an d r u i m nd Gan d r i e s be1 i i f G o e ma lcdu a o e ma sn n e

第3 8卷

氢钠溶液萃取 4次，每次 1 mL合并饱和碳酸氢钠 5 .层， 6 LL盐酸溶液调 p 2~,用 mo/ H= 3然后用三氯甲烷来源山东 2}≠ 四川 1 #

样品号 c l C 2

来源浙江 1#浙江 2#

样品号 c2 l C3 1

萃取 4次， 2 m,每次 5 L合并三氯甲烷溶液，,蒸干残渣用甲醇溶解并定容至 5 L, 即得赤芝供试品溶液 ( m生药质量浓度为 04/ L . _gm ) () 2紫芝供试品溶液的制备

C 3 C 4C 56

浙江 3#浙江 4}≠浙江 5#浙江 6#

C 1 4 Z 1Z 23

四川 2 #浙江 1}}浙江 2#浙江 3#

精密称取紫芝粗粉 40g加无水乙醇 10m ., 0 L,其余按赤芝供试品溶液的制备方法制备，即得紫芝供试品溶液 (生药质量浓度为 0 8/ L . . m ) g( )照品溶液的制备 3对’

C 7C 8 C 91 0

安徽 1#安徽 3 #浙江 7#安徽 2 #山东 1#

Z 4Z 5 Z 6 Z 7

浙江 4 #山东广西安徽

分别取灵芝酸 A、, G标准品适量，甲醇配 C、用制成每 1 mL含 0 1 g标准品的溶液 . . m13 3相似度计算 ..

Cl 1

1 C—c4赤芝样品号，l—z ) l 1为 z 7为紫芝样品号；}一6代表不同 1}#产地.

选择具有代表性的一定批量的样品，过实验通

1 2主要仪器 .H一10高效液相色谱仪 ( P C)二极管阵列 P10 HL,检测器 ( A,为美国安捷伦公司生产. D D)均

获取样本图谱 (即指纹图谱 )进行共有峰的提取，并 然后根据对共有峰进行均值或中位数计算的结果建立样品的对照指纹图谱 .将各样品的指纹图谱与再对照指纹图谱进行保留时间、色谱

峰匹配，最后采用相似度评价系统软件自动计算相似度.

1 3实验方法 .1 3 1实验条件的优化与确定 . .

在文献[—] 5 9的基础上对流动相进行优化 .考察了几种不同体积分数的乙醇溶液和无水乙醇对三萜酸成分的提取效果，现无水乙醇对灵芝的三萜发酸成分的提取效果较好；比较了加热回流 3次 (每

2结果与讨论2 1方法学考察 .2 1 1精密度试验 ..

次2 ) h和超声处理 3次 (每次 4 m n提取灵芝三萜 0 i)的效果，现加热回流的提取效果较佳 . 2 0发对 5、2 2 2 3 30n 波长下的特征峰数及峰面积进 5、4、0 m 4个

分别吸取赤芝供试品溶液各 1 L,拟定的方 0按法连续进样 6次，果发现 2结 9个共有峰的相对保留

时间的相对标准偏差 ( S均小于 2,对峰面 R D)%相积的 R D均小于 3,明精密度良好. S%表2 1 2稳定性试验 ..

行比较，中 2 0 2 2n的结果较相似，5 n其 5、5 m 2 2 m波长下灵芝三萜酸成分具有最大吸收，特征峰数较多、

峰面积较大，基线平稳，且最终确定选择 22n 5 m作为指纹图谱的检测波长 .试验采用乙腈一 . 0磷酸溶液、 0 1%乙腈一 . 5 00%

取同一赤芝供试品溶液 1 L,别在 0 2 4 0分、、、 8 1、4、6 2 h进样 6次 .果发现 2结 9个共有峰的相对保留时间的 R D均小于 2, S%相对峰面积的 R D均 S小于 3,明 2%表 4 h内供试品溶液的稳定性较好 .2 1 3重复性试验 ..

磷酸溶液、乙腈 .%冰醋酸、 2乙腈一%冰醋酸作为流 1动相对系统进行梯度洗脱，中乙腈一%冰醋酸系其 2

统的洗脱效果较佳 .最终确定的实验条件为：热回流 …… 此处隐藏：13592字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……