墩果酸对更年期大鼠作用的实验研究

第一军医大学２００２级硕士学位论文

齐墩果酸对更年期大鼠作用的实验研究

ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＯｌｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄＬｉｑｕｉｄＡｃｔｉｎｇ

ＣｌｉｍａｃｔｅｒｉｃＲａｔｓｏｎ

课题来源：自选

专业名称药剂学

娄艳

陈志良教授主任

石克成教授

石克成教授

邓虹珠教授

刘世霆教授

张忠义教授

王娟主任药师学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员

论文评阅人王娟主任药师

陶涛主任药师

２００５年５月１８日广州

硕士学位论文

齐墩果酸对更年期大鼠作用的实验研究

硕士研究生：娄艳

指导教师：陈志良

摘要

一．研究目的

本实验采用自女贞予中提取的齐墩果酸，观察齐墩果酸对更年期大鼠的作用，对更年期大鼠血液中雌二醇（Ｅ２）、卵泡刺激素（ＦＳＨ）、黄体生成素（ＬＨ）、丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧｓＨ—Ｐｘ）水平进行测定与分析。并光镜观察各组更年期大鼠子宫、卵巢、肾上腺病理切片，探讨齐墩果酸（Ｏｌｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄ，ＯＡ）能否在治疗更年期综合征（ＣＳ）治疗发挥作用。

二、材料与方法

（一）材料

雌二醇（Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ｅ２）、卵泡刺激素（Ｆｏｌｌｉｃｌｅ．．ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｍｏｎｅ，ＦＳＨ）、黄体生成素（Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅ，ＬＨ）放射免疫测定试剂盒，北京邦定生物技术有限公司；四乙氧基丙烷（Ｔｅｔｒａｅｔｈｏｘｙｐｒｏｐａｎｅ，．ＴＥＰ）贮存液，美国Ｓｉｇｍａ公司；硫代巴比妥酸（Ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃａｃｉｄ，ＴＢＡ），美国Ｓｉｇｍａ公司：５’，５’一二硫代双一２一硝基苯甲酸（５’，５’－－ｄｉｔｈｉｏｎｂｉｓ－－２－－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ，ＤＴＮＢ），美国Ｓｉｇｍａ公司；叠氮钠磷酸盐缓冲液；还原型谷胱苷肽（ｒｅｄｕｃｅｄｇｌｕｔａｍｉｏｎｅ，ＧＳＨ），美国Ｓｉｇｍａ公司；甲醇、正丁醇、三氯醋酸、叠氮钠、柠檬酸钠、过氧化氢、硫酸、盐酸、无水乙醇、正庚烷：均为国产分析纯产品；０．１Ｍ磷酸钾缓冲液（ＰＨ７．８）；黄嘌呤（１０ｍｇ／ｍ１）；黄嘌呤氧化酶（０．２５ｍｇ／ｍ１）；化学发光增强剂。紫外线分光光度计（Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ２０００．ＵＳＡ），ＵＮＩＶＥＲＳＡＬ３２Ｒ台式低温离心机（Ｇｅｒｍａｎｙ），７５２型分光光度计（上海医用设备仪器厂），电热恒温水浴箱（上海跃进医疗仪器厂），万分之一分析天平（上海天平仪器厂），ＶｉｃｔｏｒＶｌ２１０（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）

中文摘要

（二）试验方法

１选用５０只１１～１５月龄雌性ＳＤ大鼠，经阴道细胞涂片检查确定为更年期大鼠。随机分为５组（Ｎ－－－－－１０），更年期模型组、齐墩果酸低、中、高剂量组、大豆异黄酮组。另选４～６月龄，体重１５０～２２０９雌性ＳＤ大鼠ｌＯ只作为青年对照组。更年期模型组及青年对照组均予以生理盐水２ｍｌ灌胃，齐墩果酸低、中、高剂量组分别予以２５ｍｇ／ｋｇ．ｄ、５０ｍｇ／ｋｇ．ｄ、１００ｍｇ／ｋｇ．ｄ齐墩果酸２ｍｌ灌胃，大豆异黄酮组予以５００ｍｇ／ｋｇ．ｄ大豆异黄酮２ｍｌ灌胃。６周后将各组大鼠腹主动脉取血后处死，检测各组大鼠Ｅ２、ＦＳＨ、ＬＨ、ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧｓＨ—Ｐｘ水平。

２选用３０只１１～１５月龄雌性ＳＤ大鼠，经阴道细胞涂片检查确定为更年期大鼠。随机分为３组（Ｎ＝１０），更年期模型组、齐墩果酸中剂量组、大豆异黄酮组。另选４～６月龄，体重１５０～２２０９雌性ＳＤ大鼠１０只作为青年对照组。观察各组大鼠外观体征、进食量、体重变化及尿便性状等情况。６周后处死，解剖取出子宫、卵巢、肾上腺，精确称重，计算脏器指数。称重后，放入４％的福尔马林溶液中，脱水、石蜡包埋、常规切片，ＨＥ染色，光镜下观察其病理组织学变化。

三、结果

１（１）Ｅ２、ＦＳＨ、ＬＨ值的测定结果：与青年鼠对照组比较，更年期模型组大鼠Ｅ２值显著降低（Ｐ＜Ｏ．０５），ＦＳＨ、ＬＨ值明显增高（Ｐ＜ｏ．０１或Ｐ＜０．０５）；与更年期模型组比较，用药组均具有较好提高Ｅ２，降低ＦＳＨ、ＬＨ值的作用（Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ或Ｐ＜０．０５），齐墩果酸低、中、高剂量组中以齐墩果酸中剂量组效果为佳，各组间无显著性差异。

（２）ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨ—Ｐｘ值的测定结果：与青年鼠对照组比较，更年期模型组大鼠ＭＤＡ值明显增高（Ｐ＜Ｏ．０５），ＳＯＤ值显著降低（Ｐ＜０．０１）、ＧｓＨ—Ｐｘ值明显降低（Ｐ＜０．０５）；与更年期模型组比较，用药组均具有较好提高ＳＯＤ、ＧｓＨ—Ｐｘ活性，降低ＭＤＡ的作用（Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜０．０１），齐墩果酸低、中、高剂量组中以齐墩果酸中剂量组效果为佳，各组间无显著性差异。

２（１）子宫病理切片的观察结果：青年对照组大鼠子宫内膜、肌层、浆膜层基本结构清晰。内膜层子宫腺体丰富，可见顶浆分泌小泡的释放。更年期模型组子宫内膜表现为萎缩型，内膜单薄，子宫内膜表面上皮薄而光滑，由单层柱状上ＩＩ

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皮变为立方型或扁平型细胞；腺体稀少而小，腺腔小、直而狭窄，腺上皮低矮，细胞核缩小，间质细胞密度下降，胶原纤维含量增加，小动脉内膜增厚。用药组具有与更年期模型组类似的萎缩型病理改变特点，但内膜层较模型组病变有所好转，腺体数目增加，部分可见分泌活动。

（２）卵巢病理切片的观察结果：青年对照组大鼠卵巢基本结构清晰，上皮细胞为立方型，可见原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及黄体。更年鼠模型组大鼠卵巢表面上皮为单层扁平细胞，各期卵泡数目减少，有时甚至看不到卵泡，无黄体，多见闭锁卵泡及大量的间质细胞。各用药组具有与更年期模型组类似的病理改变特点，但发育正常的卵泡较多，生长卵泡增多，退化卵泡减少，黄体数目增多。

（３）肾上腺病理切片的观察结果：青年对照组大鼠肾上腺基本结构清晰，皮质髓质分界明显，无结构紊乱及瘀血改变。更年期鼠肾上腺皮质球状带、网状带较青年鼠增厚，束状带变且细胞索失去相互平行排列的结构特点而交叉成网，网状带内近束状带区瘀血明显。用药组与更年期模型组比较，球状带、网状带变薄（Ｐ＜Ｏ．０５），束状带增厚（Ｐ＜０．０１），束状带细胞索形态基本正常，网状带未见明显瘀血。

四、结论

１、齐墩果酸能提高更年期大鼠Ｅ２，降低ＦＳＨ、ＬＨ，说明齐墩果酸具有雌激素样作用。

２、齐墩果酸能提高ＳＯＤ，ＧｓＨ—Ｐｘ，降低ＭＤＡ，说明齐墩果酸能有效延缓更年期大鼠衰老过程。

３、齐墩果酸能显著改善更年期大鼠子宫内膜、肌层、浆膜层的萎缩性病理改变，使其腺体数目增加，分泌活动增强；还能有效提高卵巢生长卵泡及黄体数目；能使肾上腺束状带增厚，球状带、网状带变薄，并对瘀血及结构紊乱有显著改善。说明齐墩果酸能改善更年期大鼠子宫、卵巢、肾上腺功能，对更年期大鼠有明确治疗作用。

关键词：更年期齐墩果酸大鼠雌激素实验研究ＩＩＩ

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ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＯｌｅａｎｏｌｉｃａｃｉｄ

ｏｎＬｉｑｕｉｄＡｃｔｉｎｇＣｌｉｍａｃｔｅｒｉｃＲａｔｓ

Ｎａｍｅ：ＬｏｎＹｒａｎ

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